技術(shù)簡(jiǎn)介

MicroRNAs（miRNAs）是一類(lèi)廣 泛存在于真核生物中，長(cháng)度為～22nt的單鏈小分子非編碼RNA，在轉錄后的基因調控中發(fā)揮作用。它們廣 泛參與細胞增殖、凋亡、分化等生理過(guò)程。目前研究發(fā)現，miRNA能夠發(fā)生m6A甲基化修飾，不僅能夠改變其穩定性，而且能改變與靶mRNA的識別及結合能力，調控mRNA降解或翻譯，在各種重大人類(lèi)疾病中發(fā)揮關(guān)鍵的調控作用，并具有作為新型臨床分子標志物的潛能。

技術(shù)原理

云序生物提供 m6A 甲基化免疫沉淀測序（m6A Methylation Immunoprecipitation Sequencing，簡(jiǎn)稱(chēng) m6A MeRIP-seq）服務(wù)，助力 m6A 修飾研究。 技術(shù)原理如下：提取total RNA后，利用small RNA純化試劑盒提純small RNA（包括miRNA）；將m6A RNA甲基化特異性抗體與RNA進(jìn)行共孵育，抓取有甲基化修飾的片段進(jìn)行測序；同時(shí)需要平行測序一個(gè)對照（Input）樣本，對照樣本為未進(jìn)行IP反應的RNA。對照樣本用于消除非特異性抓取甲基化片段的背景。對比免疫共沉淀IP樣本和Input樣本中的序列片段，將miRNA m6A甲基化修飾位點(diǎn)定位到轉錄組上，并計算樣本中miRNA m6A甲基化程度。

配合專(zhuān)業(yè)的生物信息學(xué)分析，云序生物可進(jìn)一步提供高精度的miRNA m6A甲基化圖譜，幫助客戶(hù)揭示miRNA m6A甲基化在生物學(xué)功能和潛在的作用機制。

云序優(yōu)勢

一站式服務(wù)

客戶(hù)只需提供組織、細胞、體液樣品或RNA，云序生物為您完成從miRNA m6A富集，文庫制備，上機測序到數據分析整套服務(wù)流程。

抗體富集效率高

MeRIP-seq的富集效率是決定數據質(zhì)量的關(guān)鍵，云序生物MeRIP-seq實(shí)驗采用預驗證的商業(yè)化抗體和精心優(yōu)化的實(shí)驗流程，具有極高的效率和特異性。

嚴格的質(zhì)控

云序生物對MeRIP-seq實(shí)驗每一步驟均設有關(guān)鍵質(zhì)控，全程監控實(shí)驗質(zhì)量，保證客戶(hù)得到優(yōu) 質(zhì)數據。

專(zhuān)業(yè)的生物信息學(xué)分析

云序生物擁有專(zhuān)業(yè)的生物信息分析團隊，幫助客戶(hù)進(jìn)行實(shí)驗數據的全 面挖掘。

案例解析

案例：成熟microRNA在胃腸道腫 瘤中的甲基化水平

原文：Distinct methylation levels of mature microRNAs in gastrointestinal cancers
期刊：Nature Communication  影響因子：11.878 
大阪大學(xué)醫學(xué)研究生院和大阪大學(xué)醫學(xué)研究所，通過(guò)對胃腸道ai和ai旁組織進(jìn)行miRNA MeRIP-seq，發(fā)現miRNA在ai組織中的m6A修飾水平明顯提高；并且發(fā)現m6A修飾能夠改變miRNA（miR-17-5p, -21-5p, and -200c-3p a和let-7a-5p）的穩定性和對靶mRNA的識別能力；其中發(fā)生m6A修飾的miR-17-5p在早期ai癥病人的血漿中具有極高的敏感性和特異性。這些發(fā)現不僅為早期ai癥的診斷策略提供了基礎，同時(shí)也為我們對miRNA生物學(xué)的探究提供了一個(gè)新的認識。

圖注：m6A修飾的miR-17-5p可以作為早期ai的診斷標志物

樣品要求

樣品類(lèi)型

細胞、組織或RNA，其他樣本類(lèi)型及樣品量請電詢(xún)。

樣品量 

a) 細胞：2×10⁷ 

b) 組織：100 mg-1 g

c) RNA：30-300 μg（OD260/280：1.6-2.3；RNA無(wú)明顯降解28S:18S>1.5或RIN>7）

樣品運輸與保存

樣品運輸：樣品置于1.5mL離心管中，封口膜封好，干冰運輸。
樣品保存：細胞樣品或新鮮組織塊可用TRIZOL或RNA保護劑處理，液氮凍存后-80℃保存；RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中，-80℃保存，避免反復凍融。